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实时荧光定量pcr仪价格

更新时间:2021-02-26

简要描述:

实时荧光定量pcr仪价格
由荧光定量系统和计算机组成,用来监测循环过程的荧光
原始数据收集后可以开始分析。实时设备的软件能使收集到的数据进行正常化处理来弥补背景荧光的差异

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 样品到达域值水平所经历的循环数称为的循环数)。域值应设定在使的扩增效率为大,这样可以获得准确,可重复性的数据。如果同时扩增的还有标有相应浓度的分析将产生一条,可以用来计算未知样品的浓度。

所谓real-time Q-PCR技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基因,利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程,后通过对未知模板进行定量分析的方法。在 real-time 技术的发展过程中,两个重要的发现起着关键的作用:(1)在90年代早期,Taq的5′活性的发现,它能降解特异性荧光记探针,因此使得间接的检测PCR产物成为可能。(2)此后荧光探针的运用使在一密闭的反应管中能实时地监测反应全过程。这两个发现的结合以及相应的仪器和试剂的商品化发展导致real-time Q-PCR方法在研究工作中的运用。

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 PCR反应过程中产生的DNA是呈指数方式增加的,随着反应循环数的增加,终PCR反应不再以指数方式生成模板,从而进入。在传统的PCR 中,常用凝胶电泳分离并用荧光染色来检测PCR反应的终扩增产物,因此用此对PCR产物定量存在不可靠之处。在real-time Q-PCR中,对整个PCR反应扩增过程进行了实时的监测和连续地分析扩增相关的荧光信号,随着反应时间的进行,监测到的荧光信号的变化可以绘制成一条曲 线。在PCR反应早期,产生荧光的水平不能与背景明显地区别,而后荧光的产生进入指数期、线性期和终的平台期,因此可以在PCR反应处于指数期的某一点 上来检测PCR产物的量,并且由此来推断模板初的含量。为了便于对所检测样本进行比较,在real-time Q-PCR反应的指数期,首先需设定一定荧光信号的域值,一般这个域值(threshold)是以PCR反应的前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号 (),荧光域值的缺省设置是3~15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍。如果检测到荧光信号超过域值被认为是真正的信号,它可用于定义 样本的域值循环数(Ct)。的含义是:每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数。研究表明,每个模板的Ct值与该模板的起始的 存在,起始拷贝数越多,Ct值越小。利用已知起始拷贝数的可作出,因此只要获得未知样品的Ct值,即可从标准曲线上计算出该样 品的起始拷贝数。

 

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