灭菌常用的办法有化学试剂灭菌、射线灭菌、干热灭菌、湿热灭菌和过滤除菌等。可根据不同的需求，采用不同的办法，如培育基灭菌一般采用湿热灭菌，空气则采用过滤除菌。

 

　　1、热灭菌法：

 

　　热灭菌法运用压力蒸汽灭菌器高温使微生物细胞内的悉数蛋白质变性，酶活性消失，致使细胞死亡。一般有干热、湿热和间歇加热灭菌等法。

 

　　2、干热灭菌：

 

　　直接运用火焰将微生物烧死（如烧接种环、载玻片和试管口等）。不能用火焰灭菌的物品则运用热空气灭菌,将物品放在烘箱中加热到160～170℃,继续90分钟，此法适用于玻璃、金属和木质的器皿。

 

　　3、湿热灭菌：

 

　　以沸水、蒸气和蒸气加压灭菌。巴氏灭菌法便是湿热灭菌，此法有两种方式，①低温长时间处理：在61.7～62.8℃下处理30分钟；②高温短时间处理：在71.6℃或略高温度下处理15分钟。在上述诸法中，以蒸气加压灭菌作用最好，可用常压蒸气灭菌，也可在高压蒸气锅中（一般运用1千克/厘米2）灭菌,其蒸气温度可达121℃,能将耐热的芽孢在30分钟内悉数杀死。但对某些易被高压损坏的物质，如某些糖或有机含氮化合物，宜在0.6千克/厘米2压力下(110℃)灭菌15～30分钟。

 

　　4、间歇灭菌：

 

　　间歇灭菌接连3天,每天进行一次蒸气灭菌的办法。此法适用于不本领 100℃以上温度的物质和一些糖类或蛋白质类物质。一般是在正常大气压下用蒸气灭菌 1小时。灭菌温度不超越100℃,不致造成糖类等物质的损坏，而可将间歇培育期间萌生的孢子杀死，从而达到*灭菌的目的。

 

　　5、辐射灭菌：

 

　　辐射灭菌在必定条件下运用射线进行灭菌的办法。较常用的有紫外线，其他还有电离辐射（射线加快中子等）。波长在25000～80000纳米之间的激光也有强烈的灭菌能力,以波长26500纳米*。辐射灭菌法仅限于某必定材料，因所需设备杂乱，难于广泛运用。

 

　　6、渗透压灭菌：

 

　　渗透压灭菌运用高渗透压溶液进行灭菌的办法。在高浓度的食盐或糖溶液中细胞因脱水而产生质壁分离，不能进行正常的新陈代谢，成果导致微生物的死亡。

 

　　7、化学试剂灭菌：

 

　　大多数化学药剂在低浓度下起抑菌作用,高浓度下起灭菌作用。常用5％石炭酸、70％乙醇和乙二醇等。化学灭菌剂必须有挥发性，以便清除灭菌后材料上残余的药物。